长链非编码RNA ROR1-AS1 促进骨肉瘤细胞侵袭的(2)
HOS 和MG63 中转染lncRNA ROR1-AS1 的siRNA 后,lncRNA ROR1-AS1 表达量明显降低(P <0.05 或P <0.01);同时,ROR1 的表达量也随之下降(P <0.05 或P <0.01)。si-lncRNA ROR1-AS1#1 具有更好的沉默效能,用于后续实验。见图2。
图2 抑制lncRNA ROR1-AS1 表达后lncRNA ROR1-AS1和ROR1 表达变化A.转染si-lncRNA ROR1-AS1 前后OS 中lncRNA ROR1-AS1 表达情况;HOS 和MG63 中 转 染si-lncRNA ROR1-AS1 (#1 和#2),lncRNA ROR1-AS1 表达下降(*P<0.05,**P<0.01);B.转染si-lncRNA ROR1-AS1后OS 细胞中ROR1 mRNA 表达情况;HOS 和MG63 中转染si-lncRNA ROR1-AS1(#1 和#2),ROR1 表达下降(*P<0.05,**P<0.01)
2.3 lncRNA ROR1-AS1、ROR1 对OS 细胞侵袭转移能力的影响
Transwell 中,转染si-lncRNA ROR1-AS1#1 后,lncRNA ROR1-AS1 表达量下降,细胞迁移数量减少;在此基础上过表达ROR1,被抑制的细胞侵袭能力部分恢复(P <0.05)。见图3。
图3 Transwell 验证lncRNA ROR1-AS1-NC、si-lncRNA ROR1-AS1 和si-lncRNA ROR1-AS1+ROR1 组细胞侵袭转移能力的比较A.结晶紫染色(200×);B.细胞数量统计图。与NC 比较,*P <0.05
划痕实验,转染si-lncRNA ROR1-AS1#1 后,细胞运动距离减少,细胞的运动能力下降;在此基础上过表达ROR1,细胞运动距离增加(P <0.05 或P <0.01)。见图4。
图4 Scrape 验证lncRNA ROR1-AS1-NC、si-lncRNA ROR1-AS1 和si-lncRNA ROR1-AS1+ROR1 组细胞侵袭转移能力的比较A.划痕实验(200×);B.细胞数量统计图。与NC-24 h 比较,*P <0.05
2.4 lncRNA ROR1-AS1 经由ROR1 介导OS 细 胞上皮间质转化
检测lncRNA ROR1-AS1 对上皮间质转化(EMT)的影响,抑制lncRNA ROR1-AS1 表达,间质表型标志物N-cadherin 表达下降,而上皮表型标志物Ecadherin 表达上调;过表达ROR1 后,N-cadherin 表达上升,而E-cadherin 表达下降。见图5。说明lncRNA ROR1-AS1 经由ROR1 参与OS 的EMT。
图5 LncRNA ROR1-AS1 经由ROR1 介导OS 细胞EMTOS:骨肉瘤;EMT:上皮间质转化
3 讨论
肿瘤侵袭是造成患者死亡的主要原因[13]。而EMT是肿瘤侵袭中的重要环节,上皮细胞标志物表达下降,间质细胞标志物表达升高,便于肿瘤细胞从原发灶脱离,出现侵袭转移[14]。ROR1 的功能在神经系统、循环系统和呼吸系统的中首先发现[15]。ROR1 在OS等肿瘤中过表达,同肿瘤病理过程相关[16]。ROR1 可以促进EMT 和诱导增殖、迁移[17]。Dai 等[18]指出ROR1 通过非经典wnt 信号通路参与OS 的侵袭。
LncRNA ROR1-AS1 位于人基因组1p31.3,是ROR1 基因转录的反义lncRNA。Hu 等[19]首次对其功能进行报道:可与EZH2/PRC2 结合参与基因转录调控[19]。lncRNA 可通过顺式作用调节临近的基因的转录[20],所以我们推测lncRNA ROR1-AS1 可通过调控ROR1 参与OS 的侵袭。
本研究显示,lncRNA ROR1-AS1 在OS 中过表达,抑制lncRNA ROR1-AS1 表达,ROR1 表达量随之下降,OS 细胞的侵袭能力下降,EMT 的上皮表型标志物表达增高,而间质表型标志物表达降低;在此基础上过表达ROR1,OS 细胞的侵袭能力恢复,EMT 上皮表型标志物表达下降,间质表型标志物表达升高;提示lncRNA ROR1-AS1 对OS 细胞的侵袭作用的调控是依赖ROR1 的。但其具体分子结合位点及转录调控机制,仍需在后续研究中进一步探讨。
[1]Kager L,Tamamyan G,Bielack S.Novel insights and therapeutic interventions for pediatric osteosarcoma [J].Future Oncol,2017,13(4):357-368.
[2]Siegel RL,Miller KD,Jemal A.Cancer statistics,2019 [J].CA Cancer J Clin,2019,69(1):7-34.
[3]Oh JY,Kim EH,Lee YJ,et Autophagy Effect of miR-212-3p in Zoledronic Acid-Treated In Vitro and Orthotopic In Vivo Models and in Patient-Derived Osteosarcoma Cells [J].Cancers (Basel),2019,11(11).pii:E1812.
[4]Faisham WI,Mat Saad AZ,Alsaigh LN,et factors and survival rate of osteosarcoma:A single-institution study [J].Asia Pac J Clin Oncol,2017,13(2):e104-e110.
[5]Moreno F,Cacciavillano W,Cipolla M,et osteosarcoma:Incidence and survival in from the National Pediatric Cancer Registry,ROHA Network 2000-2013 [J].Pediatr Blood Cancer,2017,64(10).
[6]Schmitt AM,Chang HY.Long Noncoding RNAs in Cancer Pathways [J].Cancer Cell,2016,29(4):452-463.
[7]Bartonicek N,Maag JL,Dinger ME.Long noncoding RNAs in cancer:mechanisms of action and technological advancements [J].Mol Cancer,2016,15(1):43.
[8]Qu Z,Li S.Long noncoding RNA LINC01278 favors the progression of osteosarcoma via modulating miR-133a-3p/PTHR1 signaling [J].J Cell Physiol,2020.
[9]Hou XK,Mao JS.Long noncoding RNA SNHG14 promotes osteosarcoma progression via miR-433-3p/FBXO22 axis[J].Biochem Biophys Res Commun,2020,523(3):766-772.
文章来源:《中国微侵袭神经外科杂志》 网址: http://www.zgwqxsjwkzz.cn/qikandaodu/2021/0120/407.html