miRNA-29c 在喉癌组织中的表达及对喉癌Hep-2 (2)
<0.01)。 见图 1。
图1 miRNA-29c 在喉癌和癌旁组织中的表达情况
2.2 miRNA-29c 表达与喉癌临床病理的关系
miRNA-29c 的表达水平与患者临床分期、T 分期及淋巴转移密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、吸烟、分型及分化程度无关(P>0.05)。 见表 2。
表2 miRNA-29c 的表达与喉癌各临床病理参数的关系()临床病理参数 n miRNA-29c表达水平 t 值 P 值性别男女79 7 0. 0.年龄(岁)≤60>60分化程度高中分化低分化临床分期Ⅰ期+Ⅱ期Ⅲ期+Ⅳ期分型声门上声门声门下T 分期T1+T2 T3+T4淋巴结转移 39 47 0. 0. 56 30 0. 0. 54 32 0. 0. 23 60 3 0. 0. 0. 2.4370.041 55 31 0. 0. 无有72 14 0. 0.吸烟无有37 49 0. 0.
2.3 检测细胞转染效率
Hep-2 细胞经带有Cy3 荧光蛋白的无关序列(Cy3-NC)转染24 h,在荧光显微镜下观察转染率,转染效率约90%(封三图1)。
2.4 Q-RT-PCR 检测 miRNA-29c 在 Hep-2 细胞中的表达情况
Q-RP-PCR 结 果显 示,miRNA-29c mimics 组 、NC 组和空白对照组中miRNA-29c 的表达水平分别为(17.)、(1.)、(1.)。结果表明,转染miRNA-29c mimics 的Hep-2 细胞与NC 组及空白对照组相比,miRNA-29c 的表达水平显著升高(P<0.01)。 转染 miRNA-29c mimics 可以明显上调 Hep-2细胞的miRNA-29c 表达水平。
2.5 转染miRNA-29c 对Hep-2 细胞增殖的影响
CCK-8 测定的结果显示(封三图 2),miRNA-29c mimics 组、NC 组和空白对照组的 A 值分别为(0.)、(0.)、(0.)。 结果表明,NC 组和空白对照组细胞增殖能力明显高于转染miRNA-29c mimics 后的 Hep-2 细胞,差异有统计学意义(P<0.01),NC 组和空白对照组相比细胞增殖无明显差异(P>0.05)。转染miRNA-29c mimics 能抑制Hep-2 细胞的增殖活性(封三图3)。
2.6 miRNA-29c mimics 转染对Hep-2 细胞侵袭力的影响
Transwell 体外侵袭实验结果显示,miRNA-29c mimics 组、NC 组和空白对照组的穿膜细胞数分别为(0.)、(0.)、(0.)。 结果表明,转染miRNA-29c mimics 后,Hep-2 细胞侵袭能力显著低于NC 组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01),NC 组和空白对照组间侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05)。 见封三图 4。
3 讨论
近年来研究发现,恶性肿瘤发生发展与细胞内各种基因突变相关,并且与表观遗传调控网络的紊乱密切相关。 miRNA 作为表观遗传调控网络的重要组成部分,它的发现为肿瘤的诊断治疗研究提供了新的方向, miRNA 的表达具有明显的组织特异性,其表达紊乱可能和许多肿瘤的发生发展相关。 近年来,许多研究表明,miRNA 的异常表达与喉癌的增殖、 分化、浸润和转移等生物学行为密切相关[9-12]。
深入研究miRNA 与喉癌发生发展的关系, 将为生物学治疗喉癌提供有力的理论指导。 既往研究表明,miRNA-23a[13]、miRNA-16[14]在喉癌组织中表达异常,这说明miRNA 与喉癌的发生发展密切相关。因此,深入研究miRNA 在喉癌中的表达对其临床诊疗具有重要意义。 miRNA-29c 是Yu 等[15]最早在血液系统疾病中发现其与疾病相关,之后诸多文献报道miRNA-29c 参与如膀胱癌[16]、子宫内膜癌[17]、黑色素瘤[18]等疾病的发生发展过程。 一项针对110 例患者长达平均72 个月的随访发现miRNA-29c 可作为慢性淋巴细胞白血病的预后指标,但尚未进行功能研究[19]。 Pass等[20]也证明miRNA-29c 可评估恶性胸膜间皮瘤独立的预后情况,并通过细胞实验证实随着miRNA-29c的表达增加、肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆生长降低。 国内代大伟等[21]通过转染miRNA-29c 提高胶质瘤U251 细胞内miRNA-29c 表达量,并通过MTT实验证实,过表达miRNA-29c 可抑制细胞增殖能力。实验组细胞的凋亡比例明显升高,同时侵袭能力明显下降,提示miRNA-29c 可能具有抑制脑胶质瘤细胞侵袭和促进肿瘤细胞凋亡的作用。 miRNA-29c 在肿瘤中发挥如此重要的作用,但是在喉癌中的功能却未见报道。
本研究通过 Q-RT-PCR 检测 miRNA-29c 在 86例喉癌组织和42 例癌旁组织中的表达情况。 结果发现喉癌中miRNA-29c 的表达水平明显低于正常组织,研究还发现临床分期越晚,分化程度越低或伴有淋巴结转移患者喉癌组织中miRNA-29c 的表达水平也相对较低,miRNA-29c 的低表达对肿瘤预后有不利影响,它是喉癌患者预后不良的重要危险因素。 为了进一步探讨将miRNA-29c 用于喉癌生物靶向治疗的可能性,以喉癌Hep-2 为研究对象,通过转染miRNA-29c mimics 来进行一系列的研究。 通过荧光显微镜观察发现Lipo2000 瞬时转染法的转染效率约为90%;Q-RT-PCR 实验结果显示,转染模拟物后miRNA-29c 的表达上调了10 倍以上,表明转染的效果显著;CCK-8 及Transwell 体外侵袭实验结果表明,转染miRNA-29c 后Hep-2 细胞的增殖、 侵袭能力受到明显抑制,较NC 组及空白对照组有显著差异(P
文章来源:《中国微侵袭神经外科杂志》 网址: http://www.zgwqxsjwkzz.cn/qikandaodu/2021/0120/408.html
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