逆转录病毒介导抑制基因对人肝癌细胞血管生成(3)
2.5 Mig-7shRNA对MHCC-97H细胞侵袭力的影响
Transwell侵袭实验结果(图5,图6A)显示:Mig-7 shRNA-1组与Mig-7 shRNA-2组穿透的细胞数较其余各组显著减少(P<0.05);而Mig-7 shRNA-N组、转染空载体质粒组(vector)、ES组、MHCC-97H细胞对照组间没有显著差异(P>0.05)。结果说明下调Mig-7表达后MHCC-97H细胞侵袭能力显著降低。
2.6 Mig-7shRNA对MHCC-97H细胞迁移能力的影响
细胞迁移检测结果(图6B)显示:在12 h时,各组细胞间没有显著差异(P>0.05);在24 h时,Mig-7 shRNA-1组与Mig-7 shRNA-2组MHCC-97H细胞迁移能力明显弱于其余各组(P<0.05),Mig-7 shRNA-1组细胞迁移能力明显弱于Mig-7 shRNA-2组(P<0.05),而Mig-7 shRNA-N组、转染空载体质粒组(Vector)、ES组、MHCC-97H细胞对照组之间MHCC-97H细胞迁移能力无显著性差异(P>0.05)。这说明Mig-7shRNA能够降低MHCC-97H细胞的迁移能力。与此同时,24 h时侵袭细胞数与迁移细胞数之比(图6C)也表明了Mig-7 shRNA可使MHCC-97H细胞侵袭转移能力明显下降。
图4 转染后对各组MHCC-97H细胞间粘附能力的影响Fig.4 Changes in intercellular adhesion of MHCC-97H cells after transfection.*P>0.05 vs Mig-7 shRNA-2,Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups.**P<0.05 vs Mig-7 shRNA-2,Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups.△P<0.05 vs Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups.
3 讨论
图5 转染后对各组MHCC-97H细胞侵袭力的影响Fig.5 Changes in invasive ability of MHCC-97H cells after :Mig-7 shRNA-1;B:Mig-7 shRNA-2;C:Mig-7 shRNA-N;D:Vector;E:ES;F:Control.
肿瘤血管在肿瘤生长、侵袭及转移过程中扮演重要角色,然而,VM的发现使肿瘤的抗血管治疗更加复杂。作为肿瘤微循环的重要补充,VM为肿瘤提供了额外的营养及侵袭转移通道。研究表明,VM与多种恶性肿瘤的侵袭和转移有关,且有VM形成的肿瘤往往预后不良[9,12]。因此,研究VM形成相关机制及探索VM特异性靶点具有较重要的临床意义。
目前关于VM形成机制研究较多的作用因子主要包括血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)[16-17]、上皮细胞激酶(EphA2)[18]、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)[19-20]、基质金属蛋自酶(MMPs)[9,12]、层黏连蛋白5γ2链[19]、缺氧诱导因子1α[22]及黏着斑激酶[23]等,然而,明确的VM形成机制仍有待进一步研究。
随着以DNA测序和基因组技术为驱动的“精准医学计划”的开启,人类生命科学的基因应用时代真正来临。寻找靶向VM的特异性基因,抑制VM形成及肿瘤细胞侵袭转移,是目前HCC的研究焦点。
Mig-7是近年发现的一种新的人类基因,位于1p22.1,cDNA全长1617 bp,编码产物为富含半胱氨酸的蛋白[11]。研究显示,增加Mig-7的表达,能增强结肠癌、子宫内膜癌、肺癌、胃癌、上皮性卵巢癌等的侵袭性,而抑制其表达能有效降低肿瘤的侵袭转移能力[12,24-25]。然而,目前Mig-7具体作用机制仍不明确,有研究表明Mig-7主要由生长因子和环氧合酶-2/前列腺素E2(COX-2/PGE2)途径诱导并通过ZEB-1以及Twist调节EMT并影响肿瘤的侵袭转移[12];也有文献表明Mig-7能够参与活化MT1-MMP,活化的MT1-MMP能够激活MMP-2(MMPs超家族重要成员)并与之共同降解Ln 5γ2链为γ2'和γ2×两个片段,进而增加VM的形成及肿瘤侵袭转移能力[25]。此外,Mig-7只在能形成VM的高侵袭性肿瘤细胞中表达,而在正常组织中不表达[11-12],因此,Mig-7的发现为精准的靶向VM的基因治疗提供了一个潜在的安全、有效的途径。我们设想[26],可以通过RNAi技术抑制HCC中Mig-7的表达,进而抑制VM形成以降低肿瘤细胞侵袭和转移扩散能力,这种靶向HCC细胞Mig-7的治疗方法具有很大的临床应用潜力。同时,通过设计靶向Mig-7表达进而抑制肿瘤VM形成的治疗联合目前的多种治疗方法将大大提高常规抗肿瘤药物的疗效,尤其是与传统的靶向内皮的血管生成抑制剂(如:ES等)的联合治疗策略,可能比目前任何单独应用的抗肿瘤血管生成治疗更为有效。
图6 转染后对各组MHCC-97H细胞侵袭力及迁移能力的影响Fig.6 Changes in cell invasion and migration of MHCC-97H cells after :Transwell invasion assay showed that Mig-7 shRNA inhibited cell invasiveness.*P<0.05 vs Mig-7 shRNA-2,Mig-7 shRNA-N, vector,ES and control groups.**P<0.05 vs Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups;B:Transwell migration assay showed that the cell migration ability was suppressed by Mig-7shRNA.*P>0.05 vs Mig-7 shRNA-2,Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups.**P<0.05 vs Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups.△P>0.05 vs Mig-7 shRNA-N, vector,ES and control groups.△△P<0.05 vs Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups.C:Ratios of invasive to migratory cell numbers at 24 h.*P<0.05 vs Mig-7 shRNA-2,Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups.#P<0.05 vs Mig-7 shRNA-N,vector,ES and control groups.
文章来源:《中国微侵袭神经外科杂志》 网址: http://www.zgwqxsjwkzz.cn/qikandaodu/2021/0518/661.html